· Реактивы
В работе использованы трис, акриламид, N,N’-метилен(бис)акриламид, персульфат аммония (Sigma), ТЕМЕД, уксусная кислота, этанол, SDS, бромфеноловый синий, 2-меркаптоэтанол, агар (Difco), дрожжевой экстракт (Sigma), ИПТГ (Sigma), бакто-триптон (Difco).
Т4-ДНК-лигаза (Fermentas, #EL0014), Т4-полинуклеотидкиназа (Fermentas, #EK0031), Taq ДНК-полимераза (Fermentas), эндонуклеазы рестрикции Nco I, Xho I, Xba I, Bam HI, Bgl II, Hind III, Eco RI.
· Плазмидный вектор
pET32b(+) (Novagen)
pTWIN1 (New England Biolabs)
· Бактериальные штаммы
E.coli ER2566 ( · Питательные среды LB: 1% бакто-триптон, 0,5% дрожжевой экстракт, 1% NaCl, pH 7.3 YT-бульон: 0,8 % бакто-триптон, 0,5 % дрожжевой экстракт, 0,5 % NaCl. SOB: 2% бакто-триптон, 0,5% дрожжевой экстракт, 0,01 М NaCl, 0,01 М KCl, 0,01 М MgCl2, 0,01 М MgSO4, pH 7,5 · Буферные растворы 50´ТАЕ (50-кратный буфер для электрофореза ДНК в агарозе): М трис-ацетат, рН 8,0, 1 М Na-ацетат, 0,9 М NaCl, 50 мМ ЭДТА. Буферные системы для денатурирующего белкового электрофореза: Буфер для приготовления образцов - 125 мМ трис-HCl, рН 6,8, 3% SDS, 20% глицерин, 3% 2-меркаптоэтанол, 0,05% бромфеноловый синий; Стоковый раствор 40% акриламид/1,3% N,N'-метилен-бисакриламид в воде. LTB (буфер для разделяющего геля) 375 мМ трис-HCl, рН 8,8, 0,1%SDS; UTB (буфер для концентрирующего геля) 125 мМ трис-HCl, рН 6,8, 0,1% SDS. ЧБуфер для Taq-полимеразы: 67 мМ трис-HCl, 16,6 мМ (NH4)2SO4, 0,01 % TWEEN-20, 1,5 мМ MgCl2. Ч Буфер для ДНК-лигазы фага Т4: 25 мМ трис-HCl, рН 7,8, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ДТТ, 0,4 мМ рАТР. ЧБуфер для полинуклеотидкиназы фага Т4: 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 10 мМ MgCl2, 10 мМ ДТТ. X Buffer Tango™ (Fermentas): 33 мМ трис-ацетат (pH 7,9 при 37°C), 10 мМ ацетат магния, 66 мМ ацетат калия, 0,1мг/мл БСА. ЧБуфер для эндонуклеаз рестрикции Green (Fermentas):10мМ ТрисHCl (pH 7,5 при 37°C), 10 мМ MgCl2, 50 мМ NaCl, 0,1 мг/мл БСА. ЧБуфер для эндонуклеаз рестрикции Orange (Fermentas):10мМ ТрисHCl (pH 7,5 при 37°C), 10 мМ MgCl2, 100 мМ NaCl, 0,1 мг/мл БСА.