M-bibirevo.ru

Лечение острых болезней






Разработка методов выделения рекомбинантного сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF 165

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

VEGF - сосудистый эндотелиальный фактор роста (Vascular endothelial growth factor)

VEGFR-1 - мембранный рецептор 1 сосудистого эндотелиального фактора роста (Vascular endothelial growth factor receptor)

VEGFR-2 - мембранный рецептор 2 сосудистого эндотелиального фактора роста (Vascular endothelial growth factor receptor)

CBD - хитинсвязывающий домен

FGF-1, -2 - фактор роста фибробластов (fibroblast growth factor)

FGFR - рецептор фактора роста фибробластов

PDGF - тромбоцитарный фактор роста (platelet derived growth factor)

PDGFR - рецептор тробмоцитарного фактора роста

HIF-1 - фактор, индуцируемый при гипоксии (hypoxic inducible factor)

Ang-1,-2 - ангиопоэтины

PAS - семейство доменов (PER-ARNT-SIM)

Per - белок кодируемый геном Drosophila melanogaster, отвечающий за биоритмы организма (period circadian protein)

Arnt - аryl hidrocarbon receptor nuclear translocator protein- single minded protein- семейство факторов транскрипции («спираль-петля-спираль») (basic Helix-Loop-Helix)- опухолевый супрессор (von Hippel Lindau)- мембранный киназный рецептор (Tunica interna endothelial kinase-2)- митоген-активированная киназа (mitogen-activated protein kinase)K- фосфатидилинозитол 3-киназа (phosphatidylinositol 3-kinase)- белок сателлит фактора роста (Growth factor receptor-bound protein 2)- субстрат рецептора фактора роста фибробластов (Fibroblast growth factor receptor substrate 2)

Ras - сигнальный белок, принадлежащий семейству малых гуанозинтрифосфатаз

Raf - сигнальный белок, серин/треонин-специфичная протеин-киназа- внутриклеточная сигнальная киназа (extracellular-regulated kinase)

MEK - митоген-активированная киназа киназа (Mitogen-activated protein kinase)- семейство протоонкогенных тирозин киназKit - поверхностный цитокиновый рецептор- межклеточный матрикс (extracellular matrix)

ATP - аденозин-5`-трифосфат

БСА - бычий сывороточный альбумин

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИПТГ - изопропилтио-b-D-галактозид

ПААГ - полиакриламидный гель

ПЦР - полимеразная цепная реакция

Трис - трис(гидроксиметил)метиламин

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

DTT - 1,4-дитиотреитол

dNTP - дезоксирибонуклеозид-5`-трифосфаты

SDS - додецилсульфат натрия

TEMED - N,N,N,N-тетраметилэтилендиамин

Amp - ампициллин

Неоангиогенез - сложный многоступенчатый процесс, на каждом этапе которого задействованы различные регуляторные пути. К факторам, способствующим росту сосудов относятся ростовые факторы: кислый и основной факторы роста фибробластов (aFGF и bFGF), сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), белки клеточной адгезии, белки матрикса, матриксные металлопротеиназы (MMP). Ангиогенная эффективность многих из них показана на моделях ишемии миокарда и скелетных мышц животных, однако в клинических исследованиях основная доля приходится на VEGF и фактор роста фибробластов (FGF) (Парфенова и Ткачук, 2000). VEGF165 был первой идентифицированной изоформой семейства васкулярных эндотелиальных факторов роста. VEGF165 является основным сосудистым эндотелиальным фактором роста в человеческих тканях, поэтому нашел свое применение в качестве мощного проангиогенного препарата при моделировании процесса неоангиогенеза. Получение природного VEGF очень дорогостоящая процедура, и поэтому представляет большой интерес получение VEGF генно-инженерными методами. Применение в медицине препаратов, полученных генно-инженерным способом растёт, так как получение биологически активных белков из природных источников является, как правило, очень сложным и, как сказано выше, дорогостоящим процессом. Так рекомбинантный интерферон существенно выигрывает в сравнении с лейкоцитарным, вследствие низкой себестоимости и отсутствии контаминации конечного продукта вирусами человека (Cantell, 1998). Поэтому экспрессия чужеродных генов биотехнологическим способом представляет собой уникальную возможность для продукции важных фармацевтических препаратов.

Целью дипломной работы являлось получение рекомбинантного васкулярного эндотелиального фактора роста 165 человека, создание штамма продуцента, разработка методики выделения и очистки. Для решения поставленной цели были определенны следующие задачи:

. Получить высокоэффективный штамм-продуцент E.coli, продуцирующий рекомбинантный сосудистый эндотелиальный фактор роста.

2. Подобрать условия культивирования штамма-продуцента сосудистого эндотелиального фактора роста.

. Разработать схему выделения и очистки рекомбинатного сосудистого эндотелиального фактора роста.